丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析

丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 本文关键词：肝炎，病毒感染，人群，特征，流行

丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 本文简介：摘要：目的了解丙型肝炎病毒（HCV）感染人群中的戊型肝炎病毒（HEV）重叠感染流行情况，为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法采集2015年10月2016年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEVIgG、抗-HEVIgM筛查。对调查发现的抗-HEVIgM阳性样本进行核酸检测

丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 本文内容：

　　摘要：目的 了解丙型肝炎病毒 （HCV） 感染人群中的戊型肝炎病毒 （HEV） 重叠感染流行情况， 为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法 采集2015年10月2016年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEV Ig G、抗-HEV IgM筛查。对调查发现的抗-HEV IgM阳性样本进行核酸检测和基因分型。对HCV感染者进行肝功能筛查以及收集其人口学资料进行分析。结果 164例HCV感染者中抗-HEV Ig G阳性率为34.15%, 抗-HEV IgM阳性率为2.44%% （4/164） .抗-HEV Ig G阳性率在性别和年龄上差异均无统计学意义 （P<0.05） , 4个抗-HEV IgM阳性个体中异常指标2个， 异常个体值分别为ALT 328.05 U/L、AST 259.80 U/L、总胆红素 （TBIL） 107.65μmol/L、直接胆红素 （DBIL） 5.32μmol/L和ALT 32.01 U/L、AST 40.20 U/L、总胆红素 （TBIL） 10.65μmol/L、直接胆红素 （DBIL） 9.32μmol/L, 其中1个HEV RNA为阳性， 基因型为Ⅳd亚型。结论 HCV感染者HEV既往感染和急性感染较高。对有HCV感染史的人群进行HEV筛查很有必要， 同时要采用综合治疗。

　　关键词：戊型肝炎病毒； 丙型肝炎病毒； 血清流行病学； 基因型； 混合感染；

　　戊型病毒性肝炎 （hepatitis E, HE） 是经粪-口途径传播的急性自限性传染病， 主要临床症状为食欲减退、恶心呕吐、乏力、肝大及肝功异常， 小儿发病率低， 孕妇患戊肝病死率高。现已是世界卫生组织公认为发展中国家重要的公共卫生问题之一[1].HEV的感染呈全球性分布， 每年预估新发病例200万， 在发展中国家， 戊型肝炎属于介水传染病， 除了诱发肝病外， 还可能导致神经障碍[2].HEV感染可能会导致HBV （hepatitis B virus） 、HCV （hepatitis C virus） 、HBV/HCV人群的慢性肝病增强[3-6].目前HEV主要分为4种基因型， 其中HEV-Ⅰ型流行最广， 广泛分布在亚洲和非洲；HEV-Ⅱ型分布比较聚集， 主要集中于墨西哥、尼日利亚、纳米比亚和其他几个西非国家；HEV-Ⅲ型在猪群等动物普遍存在， 但临床上感染此型病毒的病例几乎全部来自发达国家；HEV-Ⅳ型在印度、中国和一些欧洲国家均被发现可在动物间传播。目前我国报道的HEV主要有Ⅰ型和Ⅳ型， 其中HEV-Ⅳ型感染率超过HEV-Ⅰ型[7].陆一涵等发现我国部分地区猪群中有Ⅲ型和Ⅳ型共存的现象[8].我国目前HCV与HEV合并感染的报道较少。综述国外文献后发现， HCV感染人群感染HEV病毒都是HEV-Ⅲ型， 而我国主要流行的是HEV-Ⅰ型和Ⅳ型， 因此有必要加强HCV和HEV混合感染流行特征分析。笔者现对孝感地区HCV感染者进行HEV既往感染、急性期感染、肝功能指标分析和HEV基因型分析， 具体如下。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象

　　在知情同意情况下， 2015年10月~2016年12月通过安陆市疾病预防控制中心疾控科收集不同医院上报的HCV感染者信息， 告知研究目的， 在保障个人隐私的情况下， 在个人自愿参加这项调查研究的人员中采集抗-HCV阳性者164人的人口统计学数据和采集其血清样本。样本来源于安陆市疾病预防控制中心、安陆市普爱医院、安陆市中医院、安陆市烟店卫生院。采外周静脉血5 ml, 3 000r/min离心5 min, 吸取上层血清分成两管置-80℃保存。

　　1.2 方法

　　1.2.1 HEV抗体和转氨酶检测

　　对164例HCV感染者检测抗-HEV Ig M和抗-HEVIg G （试剂由北京万泰生物药业有限公司提供） .对164份样本进行谷丙转氨酶 （ALT） 、谷草转氨酶 （AST） 、直接胆红素 （DBIL） 和总胆红素 （TBIL） 检测 （试剂由武汉生之源生物科技有限公司提供） .ALT、AST、DBIL和TBIL采用IFCC速率法， ALT/AST≥40 U/L、DBIL≥6.8μmol/L、TBIL≥18μmol/L或<2μmol/L判为异常。具体操作严格按试剂说明书进行， 整个过程严格进行质量控制。

　　1.2.2 部分HEV ORF2区域序列分离

　　对抗-HEV Ig M阳性样本用QIAamp Viral RNA Mini kit提取HEV RNA （QIAGEN） , 取备用血清样品140μl按试剂说明书的步骤进行提取， 最后获得30μl的RNA提取液。Primer Script 1st strand c DNA synthesis kit （TAKARA） , 取5μl RNA按照试剂说明书的步骤进行反转录。用巢氏RT-PCR反转录产物进行HEV ORF2区域部分序列扩增， PCR引物和程序设置按照参考文献提供的方法操作[9-10].整个实验重复两次， 阳性结果， 割胶纯化后进行克隆测序 （上海生物工程有限公司） .

　　1.2.3 序列分析

　　参照序列为HEVⅠ型代表序列：L08816 （Ⅰa） 、AY230202 （Ⅰb） 、AY204877 （Ⅰc） ;Ⅱ型代表序列：M74506;Ⅲ型代表序列：AF060668 （Ⅲa） 、AB189073 （Ⅲb） 、AB073912 （Ⅲc） ;IV型代表序列：ABl97674 （Ⅳa） 、AF103940 （Ⅳb） 、AB161719 （Ⅳc） 、AB161717 （Ⅳc） 、AJ272108 （Ⅳd） 、FJ461765 （Ⅳd） 、AY723745 （Ⅳe） 、AB0825558 （Ⅳf） 、AB220974 （Ⅳf） 、AB108537 （Ⅳg） 、GU188851 （Ⅳh） 、KU974934 （Ⅳh） 、KU974936 （Ⅳh） 、JQ993308 （Ⅳi） 、DQ450072 （Ⅳi） .

　　1.3 统计学处理

　　采用Excel 2007进行数据录入， 使用SPSS 17.0软件的率的χ检验对结果进行统计分析。使用Mega 5.0软件对不同HEV ORF2部分序列进行比对， 分析核苷酸序列的同源性， 并选择合适模型法构建系统进化树。

　　2 结果

　　2.1 一般情况

　　164例HCV者平均年龄 （53.03±12.25） 岁， 其中抗-HEV Ig G阳性率为34.15% （56/164） , 抗-HEV Ig M阳性率为2.44% （4/164） .男性抗-HEV Ig G阳性率为32.0% （24/75） , 女性抗-HEV Ig G阳性率为35.96% （32/89） , 差异无统计学意义 （χ=0.283, P=0.595） .

　　2.2 抗HEV-Ig G在HCV感染者中的年龄分布

　　HCV感染者抗-HEV Ig G阳性率在年龄上分布差异无统计学意义 （χ=0.927, P=0.921） （见表1） .

　　2.3 ORF2核苷酸部分序列同源性分析和构建基因进化树

　　采取巢式RT-PCR检测4份抗HEV-Ig M阳性血清标本， HEV RNA总检出率为25.00% （1/4） .将分离的HEV病毒株ORF2 304 bp核苷酸序列与参考病毒株序列进行比对并绘制系统进化树， 分析显示， HEV病毒株基因型属于Ⅳd亚型， 与2008年湖北省人源HEVⅣd （FJ461765） 序列同源性为97.37%.系统进化树见图1.

　　2.4 抗-HEV Ig M阳性个体肝功能指标

　　4个抗-HEV Ig M阳性个体肝功能指标2个正常， 2个异常， 分别是ALT 328.05 U/L （正常参考值0~40 U/L） 、AST 259.80 U/L （正常参考值0~40 U/L） 、TBIL107.65μmol/L （正常参考值3.42~20.5μmol/L） 、DBIL 5.32μmol/L （正常参考值0~6.8μmol/L） 和ALT 32.01 U/L （正常参考值0~40 U/L） 、AST 40.20U/L （正常参考值0~40 U/L） 、TBIL 10.65 U/L （正常参考值3.42~20.5μmol/L） 、DBIL 9.32 U/L （正常参考值0~6.8μmol/L） .

　　3 讨论

　　本调查研究首次开展HCV感染者的HEV流行调查， 其HEV既往感染和急性感染较高， 因此要开展HCV感染者的HEV筛查。本次HCV感染者没有进行慢性HEV感染调查， 先前国外有关报道HCV和HBV混合感染会导致肝炎病情加重[3-6], 因此应该增加样本量对HCV感染者抗-HEV Ig M病人进行追踪调查， 以进一步研究我国HCV与HEV混合感染的慢性转化情况。本次调查性别之间HEV既往感染差异无统计学意义。不同年龄组之间既往感染差异也无统计学意义， 跟以往独自HEV既往感染随年龄增长不一致[11-12], 可能是由于样本量不够多， 后续需增加样本量验证。

　　本研究仅仅成功分离出1条304 bp HEV ORF2序列， 经同源性比较和系统进化树分析， 分离出的1条序列属于Ⅳd亚型。与2008年湖北省人源HEVⅣd （FJ461765） 序列同源性为97.37%.Ⅳd亚型是否在此区域流行和导致混合感染后慢性转化还要增加HEV RNA阳性样本量予以验证。与先前山东省公开的猪源HEVⅣd （基因编号：KF176370） 的同源性为97.04%, 暗示可能存在猪源HEV传给人类， 且2015年对孝感地区商品猪的HEV急性感染调查结果显示普遍存在HEV急性感染[13].中国主要存在HEVⅠ和Ⅳ型。1986年我国新疆暴发流行了HEVⅠ型导致119 280人发病， 707人死亡[14].近年来中国HEVⅣ感染超过HEVⅠ， 目前中国流行主要是HEVⅣ[15].因此， 要加强对HEVⅣ在国内流行趋势和特征监测。4个抗-HEV Ig M阳性个体肝功能指标2个正常， 2个异常， 表明存在亚临床症状， 但有临床症状的比率较高， 可能跟采集抗-HEV Ig M阳性样本量较少有关， 后期需增加此类样本量加以验证。混合感染是否会导致临床症状加重需要进行后期追踪研究。

　　戊肝是一种人兽共患病， 张守德等报道安陆市是湖北省生猪养殖比较集中的地区， 对周边地区输出量较大， 而且血清学调查发现猪HEV阳性率显着高于普通人群[16-17].因此， 安陆市HCV感染者应进一步避免接触生猪这一传染源。我国已经生产和批准了全球第一个预防戊肝的疫苗， 对易感和重点人群接种疫苗是预防戊肝的重要措施；同时采取切断传播途径为主的综合性预防措施来控制戊肝的流行。有关报道HEV的不同基因型热耐受性不一致[18].因此， 加强HEV分型后， 应根据不同基因型热耐受性不同有针对地开展HEV消杀工作。

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